Nome:

ESTRADIOL
reagentes devem ser armazenados entre 2 – 8ºC e usados dentro de 60 dias. (Ver PRECAUÇÕES). MÉTODO:
TRANSPORTE:
O transporte do kit deve ser feito pela rota mais direta evitando-se as chegadas nos finais de semana e feriados no local de destino. O kit não é afetado pelo transporte FINALIDADE:
desde que seja entregue ao destinatário no período máximo de 07 dias e em uma Teste de ELISA para a determinação quantitativa de Estradiol em soro e plasma humano. Somente para uso diagnóstico IN VITRO. TERMOS E CONDIÇOES DE GARANTIA:
FUNDAMENTO:
O fabricante garante a qualidade do produto, se este for armazenado como descrito O teste de Estradiol ELISA baseia-se na interação competitiva entre o estradiol e o hormônio-enzima conjugado por um número limitado de anticorpos anti-estradiol imobilizado (de coelho). A quantidade de hormônio enzima-conjugado ligado é MATERIAIS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS:
inversamente proporcional à concentração de estradiol na amostra. • Leitora de Elisa de placas de microtitulação. Após a etapa de incubação da amostra e hormônio-enzima conjugado na cavidade, conjugado não ligado é removido por meio de lavagem. Quando a solução substrato é adicionada, ocorre o desenvolvimento de coloração azul que muda para amarelo após a adição da solução stop. A intensidade da cor é inversamente proporcional à AMOSTRA BIOLÓGICA:
A absorbância dos calibradores e amostras é determinada pelo uso de uma leitora de ELISA. A concentração das amostras desconhecidas é interpolada em uma curva • Não usar amostras lipêmicas, hemolisadas ou contendo azida sódica. padrão gerada pela utilização dos calibradores com concentrações conhecidas. • Amostras podem ser armazenadas por 3 dias entre 2 a 8 ºC, até 30 dias a –20ºC. Congelar e descongelar somente uma vez. Amostras descongeladas devem ser SIGNIFICADO CLÍNICO:
homogeneizadas. Eliminar material em suspensão por centrifugação ou filtração. O Estradiol (1,3,5(10)-estratrieno-3,17β-diol; 17β-estradiol; E2) é um hormônio esteróide C18 com peso molecular de 272,4, contendo um anel A fenólico. È o PREPARO DOS REAGENTES:
estrógeno natural mais importante detectado na mulher e no homem. Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 a 25ºC) antes do
O Estradiol é produzido pelos folículos do ovário feminino depois da estimulação pelo uso. Reagentes não utilizados devem ser sempre armazenados entre 2 a 8 ºC. Hormônio Folículo Estimulante (FSH) e secretado na circulação. Cerca de 98% do hormônio circulante está ligado, a parte restante, o hormônio livre, é o esteróide a. SOLUÇÃO DE LAVAGEM DE USO (WASH):
ativo. O Estradiol está envolvido na secreção de gonadotrofinas e estimula o Diluir a Solução de Lavagem (WS) concentrada para 1200 mL com água
crescimento dos órgãos sexuais e o desenvolvimento das características sexuais deionizada ou destilada recém obtida, livre de germes em um recipiente adequado No ciclo menstrual normal de mulheres não grávidas, o Estradiol é secretado Estabilidade: até 2 semanas quando armazenada entre 15 e 25ºC.
ciclicamente com uma característica bifásica. A maior concentração será detectada antes da ovulação. Mulheres grávidas apresentam um aumento no nível de Estradiol, b. TIRAS DE MICROTITULAÇÃO (MIC):
muito maior que no ciclo menstrual normal. As tiras estão seladas em uma bolsa de alumínio com dessecante. Antes de serem No homem, o estradiol é produzido pela glândula adrenal e testículos. Suas regras abertas, as tiras devem ficar a temperatura ambiente. As tiras não utilizadas devem são menos definidas, mas parece estar envolvido na regulação de gonadotrofinas. retornar para a bolsa de alumínio com o dessecante. As tiras armazenadas desta A dosagem do Estradiol é indicada para monitoração terapêutica no caso de maneira entre 2 a 8 ºC podem ser usadas até o vencimento da data de validade infertilidade (ex. tratamento hormonal ou fertilização in vitro). É também útil na impressa no rótulo (Ver PRECAUÇÕES). Não tocar na borda superior ou no fundo das avaliação da função ovariana, mas raramente usado para diagnóstico de tumores. DENTIFICAÇÃO E ARMAZENAMENTO:
PROCEDIMENTO DO TESTE:
Conservar entre 2 a 8 ºC.
Seguir os procedimentos exatamente como descritos. Reagentes:
MIC- 12 Tiras de Microtitulação
Importante:
Tiras descartáveis com 8 cavidades cobertas anticorpos anti-estradiol (de coelho). P1. Não misturar ou usar componentes com número de lote diferente. Não trocar a tampa dos frascos. Não usar reagentes após o vencimento da data de validade. CAL- 7 x1 mL Calibradores de A a G
P2. Não usar reagentes que possam estar contaminados ou tenham a aparência ou Calibradores (humano) para Estradiol nas concentrações de 0 pg/mL (A); 25 pg/mL (B); 100 pg/mL (C); 250 pg/mL (D); 500 pg/mL (E), 1000 pg/mL (F) e 2000 pg/mL P3. Marcar Calibradores, amostras e controles cuidadosamente na folha fornecida (G) de Estradiol. Thimerosal 0,02%; Sulfato de Gentamicina 0,05%, Proclin 300 P4. Selecionar o número necessário de tiras ou cavidades (MIC), e colocá-las CON- 25 mL Estradiol-Enzima Conjugado
P5. Realizar duplicatas dos calibradores, amostras e controles. Pipetá-los no
Coloração vermelha. Tampão Tris/MOPS 0,05 mol/L; NaCl 0,1 mol/L; Albumina fundo da cavidade.
bovina 0,5%; Proclin 300 0,3%; Conjugado estradiol-HRP. pH 6,9 ± 0,2. P6. Adicionar sempre os reagentes na mesma ordem, cronometrando para
minimizar a diferença do tempo de reação entre as cavidades. Isto é
WS- 30 mL Solução de Lavagem
importante para a reprodutibilidade dos resultados. A pipetagem das amostras não Concentrada para 1200 mL. Salina tampão TRIS 3 M; Tween 20 0,2%. deve exceder a 10 minutos. Se o tempo for superior a 10 minutos, pipetar os calibradores nas posições indicadas na metade do tempo da pipetagem das amostras. Se mais de 1 placa for utilizada, realizar uma curva para cada placa. SUB- 14 mL Solução Substrato
P7. Evitar/remover bolhas de ar antes das incubações e leitura. 3, 3’, 5, 5’-tetrametilbenzidina (TMB) 0,26 g/l; Tampão acetato de sódio 50mM; P8. A adição da Solução Substrato (SUB) inicia uma reação cinética, que é finalizada Peróxido de Hidrogênio 0,015%; DMSO <5%. pela adição da Solução Stop (STOP). Evitar luz forte durante o desenvolvimento de P9. Após cada etapa de pipetagem homogeneizar as cavidade por 20-30
STOP- 14 mL Solução Stop
segundos, sem deixar derramar seu conteúdo (aspirar e dispensar o conteúdo da cavidade de 3 a 5 vezes utilizando a ponteira do último reagente. Deve-se utilizar 1 ponteira para cada cavidade). Se possível utilizar um mixer para placas de Conservantes: Concentração total < 0,7%. PRECAUÇÕES:
ESQUEMA DE PIPETAGEM:
• Os reagentes são estáveis até a data de validade impressa no rótulo, quando CAVIDADE
armazenados entre 2 a 8 ºC, mesmo depois de abertos. Entretanto a contaminação está diretamente relacionada com o número de vezes que os reagentes são abertos e utilizados. O limite de 60 dias depois do primeiro uso é por razões de segurança. O manuseio cuidadoso dentro das Boas Práticas de Laboratório oferece a oportunidade de utilização dos reagentes após os 60 dias. Os critérios de validação deverão sempre ser encontrados. Congelamento deve ser evitado. Incubar 60 minutos entre 20-25ºC
• Todas as amostras e calibradores do kit devem ser manuseados como capazes de Lavar 3 vezes como descrito abaixo em Procedimento de Lavagem
transmitir infecção. Recomenda-se seguir as normas de biossegurança. Os calibradores foram verificados para HCV, anticorpos HIV 1 e 2 e HBsAg, e encontraram-se negativos. • Todo o material contaminado com amostra de paciente e calibradores deve ser inativado por autoclavação (60 min a 121 ºC) ou por imersão em solução de Incubar 15 minutos entre 20-25ºC (ver p8)
hipoclorito de sódio a 10% por no mínimo 60 min. • A Solução Stop (STOP) contém ácido sulfúrico, manuseá-la com cuidado porque Homogeneizar cuidadosamente. Medir a absorbância em 450 nm o mais rápido pode irritar os olhos e a pele. Em contato com os olhos enxaguar abundantemente e possível ou no máximo dentro de 30 minutos após o término da reação. Utilizar como comprimento de onda de referência 630-690 nm (se disponível). • Para descarte seguro dos reagentes e materiais biológicos, sugerimos utilizar as regulamentações normativas locais, estaduais ou federais para a preservação PROCEDIMENTO DE LAVAGEM:
O Procedimento de lavagem é crítico. Lavagem insuficiente resulta em pouca
precisão ou absorbâncias falsamente elevadas. ESTABILIDADE:
L1: Aspirar o conteúdo das cavidades, adicionar a Solução de Lavagem, aspirar
Os reagentes são estáveis até a data de validade impressa no rótulo, quando novamente o conteúdo das cavidades após 30 segundos de tempo de espera. armazenados a 2 - 8 ºC. Congelamento deve ser evitado. Depois de abertos os L2: No caso de lavadoras automáticas, realizar um prime com a solução de lavagem
Repetibilidade:
e lavar as tiras 3 vezes. Verificar se a lavadora encheu todas as cavidades completamente e aspirar após 30 segundos eficientemente (líquido remanescente L3: Após a lavagem, remover o líquido remanescente batendo a placa invertida em
Reprodutibilidade:
VALIDAÇÃO DO TESTE:
Os resultados do teste são válidos sempre que os seguintes critérios são Faixa aceitável (D.O)
COMPARAÇÃO DOS MÉTODOS - EXATIDÃO:
Estradiol ELISA foi comparado com um método RIA concorrente. 91 amostras foram testadas por um laboratório externo utilizando o teste concorrente. As mesmas amostras foram determinadas pelo kit Estradiol ELISA. Os dados individuais foram avaliados por análise de regressão não paramétrica de acordo com Passing & Bablok. A avaliação Passing&Bablock levou aos seguintes resultados: As diferenças entre as duplicatas de CAL não devem exceder 10%. APRESENTAÇÃO DO KIT:
CÁLCULO:
Nº Teste
Plotar as absorbâncias medidas contra as concentrações de CAL em um gráfico linear. A interpolação apropriada dos pontos de medição plotados resulta em uma curva de calibração, onde a concentração do analito de cada amostra pode ser DEPARTAMENTO DE SERVIÇOS ASSOCIADOS
Para esclarecimentos de dúvidas do consumidor quanto ao produto: Para o cálculo das concentrações de analitos, selecionar a opção de curva apropriada e validada (por exemplo, ponto a ponto). N.º DO LOTE, DATA DE FABRICAÇÃO, DATA DE VALIDADE VIDE RÓTULO DO As amostras com concentrações de estradiol acima dos 2000 pg/mL devem ser diluídas (1+9) com CAL A (0 pg/mL) e dosadas novamente. Multiplique o resultado BIBLIOGRAFIA:
1.Gore-Langton, R.E. and Armstrong, D.T., In: The physiology of reproduction. O papel gráfico para construção da curva e o Guia de Problemas e Soluções da
(Knoll, E. et al ed.) Raven Press, 331-385 (1998) Linha ELISA Human encontram-se disponíveis na internet, em Publicações:
2. Hall, P.F., Testicular steroid synthesis: Organization and regulation, In: see 1., pp 3. Siiter, P.K. et al, Rec. Prog. Horm. Res. 38, 457-510 (1982). INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS:
4. McNastly, K.P. et al, J. Endocrinol, 71, 77-85 (1976) A determinação sérica de estradiol é indicada para uma variedade de disfunções 5. Simpson, E.R. and MacDonald, P.C., In: Textbook of endocrinology (Williams, R.H. menstruais como puberdade precoce ou tardia de meninas, amenorréia primária e ed) Phiçadelphia: Sauders, 412-422 (1981) secundária e menopausa. Níveis reduzidos de estradiol podem ser detectados para 6. Jenner, M.R. et al, J. Clin. Endocrinol. 34, 521 (1982) insuficiência de ovários (< 10 pg/mL) ou corpo lúteo, mas também para ciclos 7. Goldtein, D. et al, Fertil. Stetil. 37, 348-354 (1982) 8. Taubert, H.D. and Dericks-Tan, J.S.E., In: Ovulation in the Human (Crosignandi, Dosagens séricas de Estradiol são importantes para a monitoração de ovulação P.G. and Mishell, D.R. eds) Academic Press, New York, 265-273 (1976) induzida, ex. com hormônio liberador de LH (LH-RH). Para fertilização in vitro a 9. Wrambsy, H et al, Human Reprodution 2, 325-328 (1987) concentração sérica de Estradiol é normalmente monitorada diariamente para a 10. MacDonald, P.C. et al, J. Clin. Endicrinol. Metabol. 49, 905 \91979) escolha do momento ótimo da administração de HCG e coleta do óvulo. 11. Peckham, M.J. and McElwain, T.J., Clin. Endocrinol. Metab. 4, 665- 692 (1975) Níveis elevados de Estradiol foram detectados em pacientes com síndrome feminilizante, ginecomastia e tumor testicular. Produzido por Human GmbH Max-Planck-Ring 21, D 65205, Wiesbaden,
A determinação isolada de Estradiol não é suficiente para diagnosticar condições Alemanha e Distribuído por In Vitro Diagnóstica Ltda
patológicas. Deve ser usado em conjunto com outras manifestações clínicas e Rua Cromita, 278, Distrito Industrial – Itabira/MG. CEP: 35903-053 Telefone: 31-3067-6400 – Fax: 31-3067-6401 VALORES DE REFERÊNCIA:
Resp. Téc.: Patrícia C. C. Vilela – CRF 4463 SIGNIFICADO DOS SÍMBOLOS UTILIZADOS NOS RÓTULOS DO PRODUTO
O conteúdo é suficiente para <n> testes Fator de Conversão: 1pg/mL = 3,67 pmol/L Cada laboratório deve estabelecer seus próprios valores de referência utilizando instrumentos, métodos de coleta e técnicas de dosagem comumente usadas no SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE:
A sensibilidade analítica foi determinada para aproximadamente 3 –6 pg/mL de Especificidade:
Reações cruzadas foram testadas pela adição de substâncias selecionadas a uma matriz de soro com concentração conhecida de Estradiol. Os resultados obtidos
INTERFERÊNCIAS:
As substâncias endógenas mais críticas como a bilirrubina, hemoglobina e
triglicérides foram testadas para verificação de interferência neste ensaio. Foram
adicionadas a amostras de pacientes com concentração de estradiol conhecida. A
tabela abaixa mostra até qual concentração não ocorre interferência:
IMPRECISÃO:
A imprecisão dentro de uma bateria de testes e entre baterias de testes foi verificada pelo emprego de um soro controle contendo valores baixo, médio e alto para Estradiol. Para estudos dentro de uma bateria 15 determinações foram realizadas e estatisticamente interpretadas. Para imprecisões entre baterias dados de 6 determinações foram avaliados. Os resultados estão resumidos abaixo.

Source: http://www.invitro.com.br/site_arquivos/pdf/estradiol.pdf